擇一抗宿主物種
通常,當(dāng)使用偶聯(lián)二抗檢測未偶聯(lián)一抗時(shí),產(chǎn)生抗體的宿主動(dòng)物物種就顯得非常重要。對于免疫組織化學(xué),產(chǎn)生一抗的物種應(yīng)盡可能與樣品物種不同。這是為了避免抗免疫球蛋白的二抗與樣品中的內(nèi)源性免疫球蛋白間發(fā)生潛在交叉反應(yīng)性。更為恰當(dāng)?shù)倪x擇是來源于兔的一抗,然后是偶聯(lián)于檢測分子的抗兔IgG二抗。如果可提供偶聯(lián)一抗,則可避免此問題。對于使用不包含內(nèi)源性免疫球蛋白的樣品的其它技術(shù),宿主物種的選擇則不那么重要。
組織裂解物和組織培養(yǎng)物上清液包含免疫球蛋白。對還原、變性樣品進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡時(shí),IgG會(huì)以50和25kDa的條帶顯現(xiàn),這兩個(gè)條帶分別對應(yīng)于IgG分子的重鏈和輕鏈。
選擇二抗
二抗應(yīng)來源于與所使用一抗相同的物種。例如,如果您的一抗為小鼠單克隆抗體,那么就需選抗小鼠二抗。我們推薦您查看二抗的數(shù)據(jù)表以確保它已在您將要使用的應(yīng)用中進(jìn)行了測試。
抗體數(shù)據(jù)表列出了已經(jīng)過測試并證明行之有效的應(yīng)用。如果未列出某項(xiàng)應(yīng)用,并不表示該抗體不適于該應(yīng)用。它只是表示尚未經(jīng)過測試并且抗體表現(xiàn)如何未知。當(dāng)應(yīng)用已經(jīng)過測試并證明無效時(shí),數(shù)據(jù)表上會(huì)加以說明。
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