纖維素 DE-52采用平均粒徑為50μm的顆粒型親水高分子聚合物,表面又用大分子糖鏈接枝,使它有更高的比表面積和更好的生物兼容性,它在高流水下保持更高載量,同時(shí)又具有更好的分辨率。由于比表面積大,平衡和洗脫的時(shí)間也更短。它經(jīng)過接枝即使是純化病毒,質(zhì)粒等超大分子的物質(zhì),載量基本保持不變。本產(chǎn)品物理和化學(xué)穩(wěn)定性好,使用壽命長,操作方便。
操作步驟:
1、
纖維素 DE-52的處理:DE52經(jīng)酸、堿處理,0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl平衡。
2、裝柱:將層析柱固定于滴定架上,柱底墊一圓形尼龍紗,出口接一細(xì)塑料管并關(guān)閉出水。將浸泡于0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl中的DE52沿玻璃棒倒入柱中,待DE52自然沉降3~5cm高時(shí),吸除0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl,或松開出水口螺旋夾,控制流速1~2ml/min,同時(shí)連續(xù)加入DE52至所需高度。待DE52*沉降后,柱面放一圓形濾紙片。
3、平衡:松開出水口螺旋夾,以0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl平衡,控制流速為15滴/min,待流出液與洗脫液之pH值達(dá)到一致時(shí),停止平衡。
4、待提取樣品的準(zhǔn)備:將蛋白裝入透析袋里,置4℃冰箱,對(duì)0.01mol/L pH8.6 Tris-Cl透析過夜。
5、加樣、洗脫與收集:用吸管吸去柱面液體,以毛細(xì)吸管沿柱壁加入樣品,樣品體積相當(dāng)于柱床體積的1%~2%,蛋白濃度為50~70mg。啟開出水口螺旋夾使樣品緩慢進(jìn)入柱床內(nèi),并用少量洗脫液清洗柱壁;待液體進(jìn)入柱床后,以0.01mol/L,pH8.6 Tris-Cl洗脫,控制流速為14~16滴/min。分部收集器收集,紫外監(jiān)測,或人工收集,以紫外分光光度計(jì)分別測定每管280nm OD值,描繪洗脫液峰。
6、濃縮:將洗脫液的280nm OD上峰段與下峰段各管分別合并,裝入透析袋,以PEG濃縮至所需體積。