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125I標(biāo)記物的純化

    125I標(biāo)記物反應(yīng)后，標(biāo)記物需進(jìn)行分離純化以除去游離125I-和其他雜質(zhì)。純化標(biāo)記物的方法有利用分子篩機(jī)制的凝膠過濾法、利用游離125I-與標(biāo)記物分子極性差異進(jìn)行吸附解離的離子交換層析法、按分子所帶電荷和直徑不同在電場作用下分子遷移速率不同進(jìn)行分離純化的聚丙烯酰胺凝膠電泳法（PAGE）以及液相色譜法（HPLC）。

    以葡聚糖凝膠（如SephadexG-50）柱層析分離純化125I標(biāo)記物為例：標(biāo)記反應(yīng)混合液經(jīng)柱層析時(shí)，需定時(shí)或定量逐管收集層析洗脫液，并用丁計(jì)數(shù)儀測定每管的放射性強(qiáng)度。通常zui先洗脫出的為聚合物雜質(zhì)放射峰，然后為含標(biāo)記物的主放射峰，隨后即為游離125I-峰。

125I-標(biāo)記物柱層析分離純化示意圖

Ⅰ．損傷和聚合標(biāo)記物；Ⅱ．125I標(biāo)記物；Ⅲ．游離125I-

    標(biāo)記物貯存一段時(shí)間后可因脫碘和自身輻射造成蛋白質(zhì)破壞形成碎片，因而需對(duì)標(biāo)記物重新純化。

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